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背景：

巨噬細胞移動抑制因子(Macrophage Migration Inhibitory Factor, MIF)是一種多效的細胞因子，以同型三聚體的形式存在于體內。MIF初被鑒定為抑制巨噬細胞遷移的T細胞衍生因子。近年來，MIF因其在血管生成和腫瘤發生發展中的可能作用而受到越來越多的關注。腫瘤內MIF的表達與血管生成生長因子如白細胞介素8 (IL-8)和血管內皮生長因子(VEGF)的表達密切相關，并且與腫瘤切除術后復發風險密切相關。

標記：

1.將細胞培養基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標記培養基。

2.提前將2×EdU標記培養基預熱，然后將150微升2×EdU標記培養基與等體積細胞培養基混合，獲得1×EdU溶液。

【注】：①不建議替換全部培養基，這樣可能會影響細胞增殖的速度。②配置好的培養基建議現用現配，用量以沒過細胞為宜。

3.孵育細胞2 h，棄培養基。

【注】：①培養時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態。②大多數腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2 h的孵育時間。

4.以1xPBS清洗細胞兩次，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。

【注】：對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。

實驗步驟：

1. 將細胞以 104-105 個細胞/孔的密度接種在 96 孔板 中，加入 100μL 培養基，含或不含待測化合物。在 CO2 培養箱中在 37℃ 下培養細胞 24 小時。

2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質。

3. 在培養箱中將培養板培養適當時間（如 6、12、24 或 48 小時）。

4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。

5. 將平板在培養箱中孵育 1-4 小時。

6. 在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7. 使用酶標儀測量 450nm 處的吸光度。

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