傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶?jī)?nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過(guò)度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

SK-MEL-5人皮膚惡性黑色素瘤細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無(wú)菌，且須在無(wú)菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長(zhǎng)。來(lái)源于不同動(dòng)物種類、組織類型的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對(duì)于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)起著關(guān)鍵作用。可根據(jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過(guò)短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過(guò)小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過(guò)大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴螅瑧?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過(guò)程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

HL-7702細(xì)胞，人肝細(xì)胞正常 人干細(xì)胞因子單克隆抗體細(xì)胞株,AMS2細(xì)胞 敘利亞倉(cāng)鼠皮膚細(xì)胞;GH-S1 小鼠β-內(nèi)啡肽(βEP)ELISA試劑盒 SAMD9： SAMD9蛋白抗體 MMP9 Others Mouse 小鼠 MMP-9 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人角膜細(xì)胞裂解物HKL 小鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA試劑盒 SAMDC： S-腺苷蛋酸脫羧酶抗體 P388 小鼠白血病細(xì)胞

Promocell C-20011 Keratinocyte GrowthMedium 2, 角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基2型(即用型) 500ml 小鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA 試劑盒 SAP62： 剪接體相關(guān)蛋白62抗體 rCF, 大鼠心臟成纖維細(xì)胞

Lncap clone FGC(人前列腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)ELISA試劑盒 SAP97： 突觸相關(guān)蛋白97抗體 人表皮黑色素細(xì)胞-深色素(HEM)( 5×105 )

C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞(L929-TK-);LTK- 小鼠β基己糖苷酶A(β-hexosaminidase A)ELISA 試劑盒 SAPAP3： PSD95結(jié)合蛋白3抗體 人T淋巴瘤轉(zhuǎn)基因細(xì)胞;Jurkat D,E 大鼠腎小管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL

IL-31RA/CRL3： 白介素31受體a抗體 T-109A彈性蛋白酶(含10mL酶解緩沖液)1mL

FGF10 Protein Human  FGF10 蛋白 大鼠脂肪甘油三酯脂酶(ATGL)ELISA試劑盒 Rabbit IgG/Biotin 化兔IgG 0.1ml

LRSAM1： LRSAM1蛋白抗體 CCNE1 Others Human 人 CCNE1 / Cyclin-E1 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

大鼠腸巨噬細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒 mouse IgG/Biotin 化小鼠IgG 0.1ml

Limd1： LIM結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 SK-N-SH, 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 低轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞,96-C細(xì)胞 PLC/PRF/5(肝癌亞力山大細(xì)胞)

SK-MEL-5人皮膚惡性黑色素瘤細(xì)胞EL4(小鼠淋巴瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0255A875(人黑色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 豚鼠胚胎細(xì)胞;104C1 人抗胸腺細(xì)胞球蛋白(ATG)ELISA 試劑盒 MMP-14(Matrix metalloproteinase-14) 金屬基質(zhì)蛋白酶-14 0.5mg

HSP70： 熱休克蛋白-70抗體 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(人膀胱癌細(xì)胞污染);ECV-304 [ECV304;ECV 304]

R 1610(倉(cāng)鼠肺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人抗信號(hào)識(shí)別顆粒抗體(SRP)ELISA 試劑盒 GFRAlpha-1(GDNF family receptor alpha-1) GDNF家族受體α-1(抗原) 0.5mg

HSP90 alpha： 熱休克蛋白90α抗體 EPHB6 Others Mouse 小鼠 EphB6 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

原代骨細(xì)胞特制無(wú)血清添加劑Many types of cells包裝：1ml 人抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA 試劑盒 Ang- II (Angiotensin II ) 血管緊張素II抗原 0.5mg