1．亮發光桿菌菌種準備

1) 發光細菌新鮮菌懸液的制備

(1) 斜面菌種培養。于測定前48h取保存菌種，于新鮮斜面上接出*代斜面，(20±0.5)℃培養24h立即轉接第二代斜面，(20±0.5)℃培養12h，再接出第三代斜面，(20±0.5)℃培養12h后備用。每次接種量不超過1接種耳。

(2）搖瓶菌液培養。取第三代斜面菌種近1環，幾接種于裝有50mL培養液的250mL三角瓶內，(20±0. 5) ℃ ,184r/min下培養 12-14h，備用。

(3) 將培養液稀釋至每毫升108一109個細胞，初始發光度不低于800mV，置冰浴中備用。

2）菌液復蘇

取冷藏的發光菌凍干粉，置冰浴中，加入0. 5mL冷的2 % NaCl溶液，充分搖勻，復蘇2min，使其具有微微綠光，初始發光度不低于800mV。

2．樣品采集與處理

1) 水樣

(1) 從不同工業廢水的各排放口，每4h采樣一次，每次取樣后于4℃保存，連續采集24h后，均勻混合后備用。

(2) 納污水體取其入口、中心、出口三個斷面混合水樣備用。

(3）以同上方法采集清潔水，作空白對照。

濁度大的污水，需靜置后取上清液。一般樣品不需加任何處理。水樣按3%比例投加NaCl，置冰箱備用。

2) 氣體樣品

以大氣采樣法采取一定體積的大氣樣品，通過氣體吸收液（(5mL)中吸收，按3％比例投加NaCl，置冰箱備用，同法收集清潔空氣作為對照組。

3) 固體樣品

取固體廢棄物，按《工業固體廢棄物有害特性試驗與監測分析方法》制備浸出液，取上清液，按3％比例投加NaCl，置冰箱備用。

3．亮發光桿菌實驗濃度的選擇

在預備實驗的濃度范圍內，按等對數間距或百分濃度取3-5個實驗濃度，同時設空白對照和參比毒物系列濃度組。

4．發光細菌法生物毒性瀏定

1) 工業廢水或有毒物質的生物毒性測定

(1) 發光菌懸液初始發光度測定。取4. 9mL 3%NaCl溶液于比色管內，加新鮮發光菌懸液或凍干粉復蘇菌懸液10μL，若測量發光度在800mV以上，允許置冰浴中備用。

(2) 取已處理待測廢水樣品，按等對數間距或百分濃度編號，并注明采集點。

(3) 按表4-40-1依次加入稀釋液，待測水樣及參比毒物系列濃度溶液。

(4) 打開生物毒性測試儀電源，預熱15min，調零點，備用。

(5) 每管加入菌懸液10μL，準確作用5 min或15min，依次測定其發光強度，記錄毫伏數。

每個濃度設3管重復。

2) 工業廢氣（或有害氣體）的生物毒性測定

(1) 氣體直接通入法。用注射器直接注入氣體于菌懸液中，經10-20min測定發光菌強度的變化。

(2) 氣體吸收法。方法同工業廢水測定法。

(3) 固體亮發光桿菌落法。挑選固態培養對數生長期的發光菌單菌落，連同培養基切下，置比色管內，測定初始發光強度，然后用注射器將待測氣體注入菌苔表面，經10-20min后，測定發光度的變化。